RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒

原理
細(xì)胞和易裂解組織首先在含有異硫*酸胍的高變性Buffer RLT Plus中裂解和勻質(zhì)化，該緩沖液能使RNases立即失活，以保證分離到完整的RNA。裂解液再流過gDNA Eliminator柱。該離心柱與高鹽緩沖液共同作用，可選擇性高效的去除基因組DNA。加入乙醇以提供RNA結(jié)合的合適條件，樣本再加入到RNeasy Mini離心柱。含有硅膠膜的特制離心柱能特異性的結(jié)合裂解細(xì)胞中的RNA。

RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒

操作流程
可從多達(dá)107個(gè)細(xì)胞或30 mg組織中純化總RNA。簡(jiǎn)潔的工作流程可在25分鐘內(nèi)純化得到已去除基因組DNA的RNA（參見RNeasy Plus procedure ）。樣本首先被裂解和勻質(zhì)化。裂解液流過gDNA Eliminator柱，在流過gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇，樣本再加上樣到RNeasy Mini離心柱。RNA結(jié)合到膜上，污染物被洗去。獲得高品質(zhì)RNA，洗脫體積30 ?l或更大。
處理不同的起始樣本可用不同的實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)方案的不同之處主要在于樣本的裂解和勻質(zhì)化。樣本上樣到gDNA Eliminator柱之后的步驟就類似。此操作流程適合富集mRNA，不包括大部分小于200 nt的RNAs（如rRNAs和tRNAs）。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可從培養(yǎng)細(xì)胞中純化含miRNA等小RNAs的總RNA。
使用Buffer RLT Plus（RNeasy Plus Mini Kit提供）進(jìn)行組織破碎和勻質(zhì)化時(shí)，可能會(huì)產(chǎn)生過多泡沫。在破碎和勻漿前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX（單獨(dú)提供）可充分減少泡沫產(chǎn)生。Reagent DX經(jīng)仔細(xì)檢測(cè)，表明配合此試劑盒使用不會(huì)影響RNA的純度或下游應(yīng)用。